Ruth Killius a commencé à jouer de l’alto à l’âge de quatre ans. Elle a étudié avec Ulrich Koch et Kim Kashkashian et s’est perfectionnée par des cours et de la musique de chambre avec Wolfgang Marschner. Elle a eu une chaire de professeur à Mayence et donne régulièrement des
cours. Sur commande du Festival de Salzbourg, Heinz Holliger a écrit Janus, un double concerto pour violon, alto et petit orchestre pour Ruth et son mari Thomas Zehetmair. Le double concerto That Subtle Knot de John Casken est également dédié au couple.
En 1994, Ruth Killius a fondé avec son mari le Quatuor Zehetmair, qui est devenu l’un des meilleurs quatuors à cordes du monde. L’enregistrement des 1er et 3e quatuors de Schumann leur a valu le Gramophone Award de l’année, les prix Edison et Klara et le Diapason d’Or de l’année. Un enregistrement des quatuors
à cordes n°4 de Hindemith et n°5 de Bartók a également été récompensé par le Diapason d’Or de l’année. L’ensemble a ensuite remporté le prix Hindemith de la ville de Hanau. Le dernier album du Quatuor est dédié à Beethoven, Bruckner, Hartmann et Holliger.
Ruth Killius a enregistré un CD avec des oeuvres d’Elliott Carter et Isang Yun, avec Heinz Holliger pour ECM.
L’enregistrement de la Sinfonia Concertante de Mozart avec l’Orchestra of the Eighteenth Century (Orchestre du XVIIIe siècle), dirigé par Frans Brüggen et publié par le label Glossa, est considéré comme un enregistrement de référence.
En duo avec Thomas Zehetmair, Ruth Killius se produit dans de nombreux centres musicaux. ECM a sorti l’album Manto and Madrigals en mars 2011 avec des oeuvres de Scelsi, Bartók, Holliger et Martinů, entre autres.